Bagaimana cara membuat mouse brainbow?

Bagaimana cara membuat mouse brainbow?

Untuk membuat gambar ini, generasi baru tikus “Brainbow” dibuat dengan menyilangkan tikus asli dengan tikus yang mengandung gen Cre di bawah kendali promotor Islet-1.

Apa itu mouse brainbow?

Brainbow adalah teknik pelabelan sel genetik di mana ratusan warna berbeda dapat dihasilkan oleh ekspresi stokastik dan kombinatorial dari beberapa protein fluoresen yang berbeda secara spektral.

Siapa yang menemukan brainbow?

Pada tahun 2007, Joshua Sanes dan Jeff Lichtman, keduanya dari Departemen Biologi Molekuler dan Seluler Harvard, memanfaatkan atribut Cre-lox ini untuk menciptakan sistem pelabelan saraf tikus Brainbow. Brainbow-1 dan -2 telah disempurnakan lebih lanjut untuk membuat Brainbow 3.2.

Apa itu tikus confetti?

Tikus Confetti adalah sistem reporter berbasis loxP di mana rekombinasi DNA yang bergantung pada Cre menyebabkan ekspresi permanen dari salah satu dari beberapa kemungkinan protein fluoresen secara stokastik2. Persilangan galur Cre spesifik jaringan dengan galur R26R-Confetti memberikan kekhususan pelabelan.

Bagaimana cara kerja sistem CRE LOX?

Protein cre recombinase mengikat ke daerah 13 bp pertama dan terakhir dari situs lox membentuk dimer. Dimer ini kemudian berikatan dengan dimer di situs lox lain untuk membentuk tetramer. DNA untai ganda dipotong di kedua situs loxP oleh protein Cre. Untaian tersebut kemudian digabungkan kembali dengan DNA ligase dalam proses yang cepat dan efisien.

Apa itu ekspresi Cre?

Cre recombinase adalah enzim tirosin rekombinase yang berasal dari bakteriofag P1. Enzim menggunakan mekanisme mirip topoisomerase I untuk melakukan peristiwa rekombinasi spesifik lokasi. Dua spesies DNA terpisah yang keduanya mengandung situs loxP dapat mengalami fusi sebagai hasil rekombinasi yang dimediasi Cre.

Infeksi apa itu cre?

Infeksi CRE (carbapenem-resistant Enterobacteriaceae) berasal dari bakteri yang biasanya ditemukan di saluran pencernaan orang yang sehat.

Siapa yang menemukan Cre lox?

Nat L. Sternberg

Bagaimana Anda memperkenalkan situs loxP?

Situs LoxP diperkenalkan dengan cara yang tidak mengganggu fungsi gen yang ditargetkan. Tikus kanan: strain transgenik yang mengekspresikan Cre-recombinase di bawah kendali promotor tipe sel atau spesifik jaringan.

Situs LoxP dapat ditemukan di cis yang mengelilingi gen tertentu, atau dapat ditemukan di trans, di mana dua situs LoxP terletak di area genom yang terpisah. Salah satu keuntungan menggunakan sistem Cre–LoxP adalah kemampuan untuk memanipulasi transgen secara in vivo.

Apa itu kaset berhenti?

Kaset STOP terdiri dari bagian 3′ dari gen His3 ragi, urutan poliadenilasi SV40 dan kodon inisiasi terjemahan palsu diikuti oleh situs donor sambungan 5′.

Apakah Cre lox dapat dibalik?

Semua peristiwa rekombinasi yang dimediasi oleh FLP atau Cre adalah reversibel. Sedangkan eksisi sepotong DNA yang diapit oleh situs loxP/FRT lebih disukai daripada reintroduksi, inversi dan re-inversi terjadi pada probabilitas yang sama.

Bagaimana cara membuat mouse CRE LOX?

Dalam sistem ini, wilayah yang diinginkan diapit oleh dua situs lox (floxed) dihapus atau dibalikkan oleh rekombinasi yang dimediasi Cre, yang mengarah ke knockout gen hanya dalam sel yang mengekspresikan Cre. Secara umum, tikus Cre/lox dihasilkan dengan mengawinkan mouse Cre-driver dengan mouse flox.

Apa itu situs lox p?

Situs LoxP adalah urutan 34 bp terarah yang terdiri dari dua situs pengenalan 13 bp yang dipisahkan oleh wilayah spacer 8 bp. Urutan tidak terjadi secara alami dalam genom yang dikenal selain bakteriofag P1, dan cukup lama sehingga tidak mungkin terjadi secara kebetulan.

Apakah Cre sebuah gen?

Cre (Cre recombinase) adalah salah satu tirosin site-specific recombinases (T-SSRs) termasuk flipase (Flp) dan D6 specific recombinase (Dre) [1,2]. ditemukan sebagai DNA rekombinase 38-kDa yang dihasilkan dari gen cre (siklisasi rekombinase) bakteriofag P1 [3,4,5,6].

Untuk apa tikus Cre digunakan?

Sistem Cre/lox adalah salah satu alat paling kuat dan serbaguna yang dikembangkan untuk genetika tikus. Ini memberi peneliti tikus kontrol canggih atas lokasi dan waktu ekspresi gen. Cre/lox biasanya digunakan untuk membuat alel knockout, tetapi juga dapat digunakan untuk mengaktifkan ekspresi gen.

Apa itu optogenetika CRE?

Namun, secara singkat, Cre recombinase adalah enzim yang mengkatalisis rekombinasi situs-spesifik antara dua urutan pengenalan DNA yang dikenal sebagai situs loxP. Setiap DNA yang ada di antara dua situs loxP dengan orientasi yang sama (DNA ‘floxed’) akan dipotong.

Antibiotik apa yang resisten terhadap CRE?

CRE menjadi perhatian utama pasien dalam pengaturan perawatan kesehatan karena mereka resisten terhadap antibiotik carbapenem, yang dianggap sebagai garis pertahanan terakhir untuk mengobati infeksi bakteri yang resistan terhadap banyak obat.

Apakah CRE lebih buruk dari MRSA?

Dianggap lebih berbahaya daripada MRSA, Dr. Frieden menyebut CRE sebagai “Bakteri Mimpi Buruk” karena tingkat kematiannya yang tinggi, resistensinya terhadap hampir semua antibiotik, dan kemampuannya menyebarkan resistensi obatnya ke bakteri lain.

Disinfektan apa yang membunuh cre?

CRE dibunuh dengan menggunakan panas atau pemutih.