Rose Bengal adalah tes laboratorium berdasarkan reaksi antigen-antibodi untuk diagnosis brucellosis. Teknik ini memungkinkan deteksi antibodi spesifik terhadap bakteri Brucella abortus dalam sampel serum manusia. Hasilnya dapat dilaporkan secara kualitatif atau semi-kuantitatif.
Bentuk kualitatif menyatakan apakah pasien positif atau negatif untuk tes, yaitu ada atau tidaknya antibodi. Sementara itu, laporan semi-kuantitatif dilaporkan dalam IU/ml dan menunjukkan perkiraan jumlah antibodi yang ada. Perlu dicatat bahwa antibodi hanya akan diproduksi jika pasien telah kontak dengan mikroorganisme.
Reaksi Rose Bengal pada pelat aglutinasi. Sumber: diambil dari video https://youtu.be/igAVQ-GiyGY
Karena kesederhanaannya, sensitivitas dan spesifisitasnya yang tinggi, ini adalah salah satu teknik seroaglutinasi yang paling banyak digunakan dalam pengobatan sebagai tes awal untuk diagnosis penyakit ini.
Beberapa peneliti telah membandingkan efektivitas tes Rose Bengal dengan teknik lain, seperti seroaglutinasi (antigen demam) dan telah mengamati bahwa meskipun ada korelasi yang baik, mereka melihat kasus terisolasi di mana tes antigen demam negatif dan Rose de Positive flare.
Perbedaan yang didapat adalah karena pasien tersebut memiliki subkelas antibodi IgG terhadap Brucella abortus dengan kapasitas pengikatan yang lebih baik pada pH asam, sehingga mereka dapat bereaksi dengan reagen Rose Bengal tetapi tidak dengan antigen demam.
Dalam hal ini, mereka menyarankan agar reagen dari teknik antigen demam dimodifikasi menjadi pH asam sehingga mereka dapat mendeteksi jenis kasus ini.
Indeks artikel
Dasar
Reagen Rose Bengal terdiri dari suspensi antigenik. Ini terdiri dari strain S99 Brucella abortus, diencerkan dalam buffer asam laktat (pH 3,6), ditambah fenol dan pewarna Rose Bengal.
Oleh karena itu, dalam sampel yang dicari adalah antibodi anti-Brucella, jika ada maka akan bereaksi dengan antigen reagen dan reaksi aglutinasi yang terlihat secara makroskopis akan diamati. Tes ini mendeteksi antibodi IgM atau antibodi IgG.
Ini berarti bahwa ia dapat mendeteksi penyakit baik dalam tahap akut di mana antibodi IgM menang atau dalam tahap kronis di mana antibodi IgG mendominasi.
Ini merupakan keuntungan karena meningkatkan sensitivitas tes tetapi pada saat yang sama itu merugikan karena tidak membedakan antara satu tahap dan tahap lainnya, karena reaksi dengan antibodi IgM dan IgG adalah identik.
Pengujian harus selalu dilakukan bersama-sama dengan kontrol negatif dan kontrol positif. Kontrol negatif mengandung serum hewan tanpa antibodi dan kontrol positif mengandung serum asal hewan dengan 50 IU/ml antibodi anti-Brucella.
Menggunakan
Brucellosis adalah penyakit serius yang cenderung kronis dan berbahaya, sehingga sangat penting untuk didiagnosis sejak dini. Ini adalah zoonosis dan manusia dapat terinfeksi melalui kontak langsung dengan bahan yang terkontaminasi, orang yang paling rentan adalah dokter hewan dan penjaga hewan.
Infeksi juga dapat terjadi dengan memakan daging mentah yang terinfeksi, di antara bentuk-bentuk penularan lainnya.
Penyakit ini menyerang secara lokal atau sistemik. Bentuk sistemik adalah yang paling serius, karena berbagai organ dapat terpengaruh, termasuk sistem endotel retikulum (hati, limpa, sumsum tulang), kulit (selulitis dan limfadenopati), sistem pernapasan (pneumonia), sistem muskuloskeletal (radang sendi, sakroiliitis dan spondilitis). ), diantara yang lain.
Tes Rose Bengal adalah teknik yang sangat berguna untuk melakukan skrining awal, karena sangat murah, mudah digunakan, dan dengan spesifisitas dan sensitivitas yang tinggi.
Kasus negatif palsu dan positif palsu sangat jarang, dan dapat terjadi pada orang dengan titer antibodi yang sangat rendah (<25 IU/ml) atau sangat tinggi (>1000 IU/ml).
Proses
bahan
-Rose Bengal Kit
-Latar belakang putih piring aglutinasi
-50 l pipet
-Rotator (opsional)
-Pusaran
Teknik (metode kualitatif)
Kit Rose Bengal Komersial dilengkapi dengan reagen siap pakai.
-Temperasikan reagen sebelum mulai bekerja.
-Pelat aglutinasi memiliki lingkaran yang digambar, masing-masing untuk sampel yang berbeda. Gunakan 3 lingkaran, yang pertama untuk kontrol negatif, yang kedua untuk sampel, dan yang ketiga untuk kontrol positif.
-Tempatkan setetes atau 50 l kontrol dan sampel dalam lingkaran yang sesuai.
-Campur reagen Rose Bengal menggunakan vortex. Tempatkan setetes di sebelah yang ditempatkan sebelumnya.
-Campur dengan tusuk gigi kayu (gunakan satu untuk setiap spesimen atau kontrol). Buat gerakan melingkar dan menyebar sehingga Anda menutupi seluruh lingkaran.
Sumber: gambar diambil dari Video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Tata letak gambar yang diedit.
-Tempatkan pelat pada rotator otomatis pada 80 hingga 100 RPM atau putar secara manual selama 4 menit. Baca buktinya di akhir waktu ini.
-Memverifikasi bahwa kontrol memberi seperti yang diharapkan. Bandingkan reaksi sampel uji dengan kontrol. Laporkan sebagai positif jika aglutinasi diamati dan sebagai negatif jika tidak ada aglutinasi.
Tes positif menunjukkan bahwa pasien memiliki jumlah yang sama atau lebih besar dari 25 IU / ml antibodi anti-Brucella.
Interpretasi reaksi positif (dengan aglutinasi) dan negatif (tanpa aglutinasi). Sumber: Citrulline [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)]. Gambar yang diedit.
Teknik (semi-kuantitatif)
Jika sampel sangat positif dalam reaksi kualitatif, itu bisa semi-kuantifikasi. Untuk ini, pengenceran ganda serial sampel dilakukan dengan larutan garam fisiologis. Prosedur yang dijelaskan di atas dilakukan dengan setiap pengenceran.
Hal ini juga diinterpretasikan dengan mengamati aglutinasi secara makroskopis. Hasilnya akan menjadi titer pengenceran tertinggi di mana hasil positif diamati.
Untuk menghitung perkiraan nilai antibodi anti-Brucella, rumus berikut digunakan:
25 IU / ml x titer reaksi = IU / ml
Contoh, jika seorang pasien dalam uji semi-kuantitatif tes positif pada pengenceran, dan 1/8 dan mulai negatif dari pengenceran 1/16 dan seterusnya, ini berarti bahwa pasien memiliki titer 8.
Menerapkan rumus:
25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml
QA
-Kit memiliki tanggal kedaluwarsa dan harus dihormati. Seharusnya tidak digunakan jika reagen telah kedaluwarsa.
-Selama penggunaan, pastikan reagen tidak mengandung partikel padat, karena ini merupakan tanda kerusakan.
-Jauhkan antara 2 dan 8 ° C.
-Jangan dibekukan, tindakan ini merusak reagen secara permanen.
-Selalu lakukan tes bersama dengan kontrol negatif dan positif.
-Teknik ini mentolerir sampel serum dengan tingkat lipemia dan hemolisis tertentu, namun tidak dianjurkan untuk menggunakan serum lipemik dan hemolisis yang berlebihan, kedua kondisi tersebut mengubah hasil tes.
-Selalu bawa reagen ke suhu kamar sebelum memulai analisis.
-Jangan menafsirkan reaksi yang memakan waktu lebih lama dari waktu yang disarankan, karena ini menghasilkan laporan positif palsu, karena setelah waktu tertentu reagen mengendap, mensimulasikan reaksi positif.
-Teknik ini 100% sensitif dan memiliki spesifisitas 98%.
-Setelah semi-kuantifikasi 1000 IU / ml ada kemungkinan mengamati efek prozone (negatif palsu karena kelebihan antibodi dibandingkan dengan jumlah antigen).
Referensi
- Rubio M, Barrio B dan Díaz R. Nilai Rosa de Bengal, Coombs dan tes kontra-imunoelektroforesis untuk mendiagnosis kasus brucellosis manusia di mana aglutinasi serum negatif. Departemen Mikrobiologi. Pelayanan Mikrobiologi Klinik. Klinik Universitas. Universitas Navarra. 406-407. Tersedia di: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- “Brucellosis.” Wikipedia, Ensiklopedia Bebas . 6 Des 2019, 14:37 UTC. 18 Des 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
- Laboratorium Monlab. Monlab mawar bengal – tes. 2016.Tersedia di: monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Pdt Peru . Med.Exp . Kesehatan Masyarakat 1997; 14 (1): 63-66. Tersedia di: scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Tindak lanjut reaksi berantai klinis, serologis dan polimerase dari keluarga dengan brucellosis. Pdt. infeksius. 2014; 31 (4): 425-433. Tersedia di: scielo.conicyt.